Stanza nel castello.
Entrano Macbeth, divenuto re, e Lady Macbeth. Anche la seconda profezia si è dunque avverata: Malcolm, figlio di Duncano, è fuggito nella vicina Inghilterra, suscitando il sospetto di avere ucciso il padre. Ma le streghe hanno predetto il trono al figlio di Banco: entrambi devono quindi essere eliminati. La regina, rimasta sola, invoca le tenebre perché nascondano il “nuovo delitto” («La luce langue, il faro spegnesi»).

Parco.
Compare un coro di sicari che aspetta al varco Banco. Quest’ultimo entra in scena col figlio Fleanzio «pien di tristo presagio e di sospetto». Banco viene trucidato, ma Fleanzio riesce a fuggire.

Magnifica sala.
Durante un banchetto, Macbeth è informato della morte di Banco e della fuga di suo figlio. Nel frattempo la regina intrattiene gli ospiti che affollano le sale del castello, cantando un brindisi («Si colmi il calice»). Ma i festeggiamenti sono presto interrotti dall’apparizione dello spettro di Banco che, invisibile a tutti, si mostra minaccioso a Macbeth. Invano Lady Macbeth cerca di riportare la serenità fra gli ospiti: il Finale si chiude con un concertato di sgomento durante il quale Macbeth decide di interrogare ancora le streghe per conoscere il suo futuro.